實驗原理 本試劑盒為一種直接競爭ELISA試劑盒。在微孔條上預包被偶聯抗原；加入樣品或標準品，樣品或標準品中的去氫表雄酮與微孔條上預包被的偶聯抗原競爭結合酶標記的去氫表雄酮多克隆抗體，游離的酶標記抗體通過洗滌被出去；再加入顯色液，結合的酶標記抗體是無色的顯色液轉化為藍色，加入反應終止液后再轉化為黃鱔，在450nm處測量，樣品吸光值與樣品中的去氫表雄酮含量成負相關，通過標準曲線即可計算出樣品中去氫表雄酮含量。 ? ? 試劑盒技術指標 檢測限：? 0.1ppb 檢測范圍：0.1 ppb ? 62.5ppb ? ? 交叉反應： Androsterone（雄甾酮）???????? 0.1％ Androstenedione(雄烯二酮)?????? 0.25％ Etiocholanolone（本膽烷醇酮）?? 0.1％ Testosterone（睪丸酮）????????? 0.01％ Cortisol（皮質醇）????????????? 0.01％ Progesterone（孕酮）??????????? 0.25％ Estradiol（雌二醇）???????????? 0.01％ ? ? 試劑盒組成及試劑配制 1.???????? 酶標板：96T/8孔 2.???????? 標準品溶液：0ppb,0.1ppb,0.5ppb,2.5ppb,12.5ppb,62.5ppb（1ml/瓶） 3.???????? 酶標記物液：??? 7ml/瓶。 4.???????? 底物緩沖液：??? 7ml/瓶。 5.???????? 底物液：??????? 7ml/瓶。 6.???????? 終止液：??????? 7ml/瓶 7.???????? 20倍濃洗滌液：? 50ml/瓶。 ? ? 樣品前處理方法： ? 1. 膠囊類樣品：取片劑或膠囊試樣進行粉碎混勻，稱取0.1000g試劑（準確至0.001g）于離心管中，加入1ml甲醇使用超聲提取5min后以3000r/min離心3min。準確取0.1ml試樣定容至1ml，檢測時加入50微升進行檢測。 2. 茶葉樣品：用研缽研碎茶葉樣品，稱取1g研碎的樣品，加入1ml甲醇，漩渦混勻5min后，放振蕩器上震蕩15min；3000r/min離心3min，轉移出上清，取0.1ml定容至1ml。取50μL進行分析。 3.血清樣品：將血清3000r/min離心3min，取上清50μL進行分析。 ? ? 操作步驟 1.? 加試劑盒從冷藏環境中取出，置于室溫下平衡30min以上。 2.? 加樣：加入50μL標準品或50μL待測樣品，然后每孔加入50μL酶標記物，輕輕混勻，室溫下孵育30 min。 3? 洗板4-5次，每次浸泡30秒，拍干。。 4???????? 顯色：每孔加入底物緩沖液50μl，再加底物液50μl，輕輕振蕩混勻，25℃環境避光顯色10min。。 5．測定：每孔加入終止液50μl，輕輕振蕩勻，設定酶標儀于450nm處（建議用雙波長450/630nm檢測，在20min內讀完數據），測定吸光度值。 ? ? 結果判定 ??以標準物的濃度為橫坐標（對數坐標），OD值為縱坐標（普通坐標），在半對數坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實際濃度。 ? ? 注意事項 1、室溫低于20℃或試劑及樣本沒有回到室溫（20-25℃）會導致所有標準的OD值偏低。 2、洗板拍干后應立即進行下一步操作。 3、混合要均勻，洗板要徹底，否則會出現重復性不好的現象。 4、反應終止液為2M**，避免接觸皮膚。 5、將不用的微孔板放進自封袋重新密封 標準物質和無色的發色劑對光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。 6、不要使用過了有效日期的試劑盒，不要使用不同批號試劑盒中的試劑。 7、顯色液若有任何顏色表明變質，應當棄之，0標準的吸光度值小于0.6時，表示試劑可能變質。 ? 儲藏條件和保質期 儲藏條件：試劑盒于2-8℃保存，不要冷凍。 保 質 期：該產品有效期為1年，生產日期見包裝盒